АО «Медицинский университет Астана»
Кафедра: Микробиологии, вирусологии им.Ш.И. Сарбасовой
СРС №2
Тема: Инфектология как наука и место в ней микробиологии. Микроскопические
методы
Содержание
Введение
1. Основные методы выявления микроорганизмов
2. Микроскопические методы исследования морфологии бактерий
и грибов
Приготовление препаратов для
микроскопического исследования
Приготовление препарата для изучения микроорганизмов в
нативном виде
Приготовление фиксированных препаратов-мазков
3. Методы окраски мазков
Введение
Инфектология — наука, изучающая инфекционный процесс,
инфекционную болезнь, инфекционную патологию, возникающую в результате конкурентного
взаимодействия организма человека с патогенными или условно-патогенными микроорганизмами,
и разрабатывающая методы диагностики, лечения и профилактики инфекционных болезней.
Инфекционный процесс — это комплекс взаимных приспособительных
реакций на внедрение и размножение патогенного микроорганизма в макроорганизме,
направленный на восстановление нарушенного гомеостаза и биологического равновесия
с окружающей средой.
Современное определение инфекционного процесса включает взаимодействие
трех основных факторов — возбудителя, макроорганизма
и окружающей среды, каждый из которых может оказывать существенное
влияние на его результат.
Патогенные микроорганизмы вызывают инфекционные
заболевания у здоровых лиц. Патогенные микробы активно проникают в чувствительные
организмы, так как паразитирование — важная часть их жизненного цикла.
Условно-патогенные микроорганизмы, как правило,
лишены болезнетворных свойств и не вызывают инфекционных заболеваний у здорового
человека. Условно-патогенные микробы вызывают поражения после пассивного переноса
во внутреннюю среду организма. Важные условия их развития
— массивность инфицирования и нарушения сопротивляемости организма.
Условно-патогенные и непатогенные (точнее, не способные вызывать
поражения у здорового человека) микробы могут при определенных условиях вызывать
оппортунистические (от англ. opportunity, возможность, удобный
случай) инфекции. Подразделение микроорганизмов на непатогенные и условно-патогенные
виды имеет нечеткие границы.
Некоторые микробы (например, условно-патогенные) способны размножаться
в организме человека, не причиняя ему вреда. Это явление можно рассматривать как
взаимную адаптацию микро — и макроорганизма. Такая форма паразитизма называется
носительство.
1. Основные методы выявления микроорганизмов
Микроскопические методы включают приготовление
мазков и препаратов для микроскопирования. В большинстве случаев результаты микроскопических
исследований носят ориентировочный характер, так как многие микроорганизмы лишены
морфологических и тинкториальных особенностей.
Микробиологические методы позволяет точно установить
факт наличия возбудителя в исследуемом материале: включает культивирование, выделение
чистой культуры и идентификацию микроорганизмов с учетом морфологических, тинкториальных,
культуральных, биохимических, токсигенных и антигенных свойств.
Биологические методы направлены на определение
наличия токсинов возбудителя в исследуемом материале и на обнаружение возбудителя,
включают заражение лабораторных животных с последующим исследованием их.
Серологические методы выявления специфических антител
и антигенов возбудителя — важный инструмент в диагностике инфекционных заболеваний.
Аллергологические методы. Антигены многих возбудителей
обладают сенсибилизирующим действием, что используют для диагностики инфекционных
заболеваний (кожно-аллергические пробы).
2. Микроскопические методы исследования морфологии бактерий
и грибов
Приготовление препаратов для микроскопического
исследования
Для приготовления препарата исследуемый материал берут из пробирки,
колбы или чашки Петри бактериологической петлей или стерильной пипеткой. В некоторых
случаях используют для этой цели препаровальные иглы.
Приготовление препарата для изучения микроорганизмов
в нативном виде
Метод «висячей капли». Препарат готовят
на покровном стекле, в центре которого наносят одну каплю бактериальной культуры.
Затем предметное стекло с лункой, края которой предварительно смазывают вазелином,
прижимают к покровному стеклу так, чтобы капля находилась в центре лунки. Быстрым
движением переворачивают препарат покровным стеклом вверх. В правильно приготовленном
препарате капля должна свободно висеть над лункой, не касаясь ее дна или края. Для
микроскопии вначале используют малый сухой объектив 8Х, под увеличением которого
находят край капли, а затем устанавливают объектив 40Х и исследуют препарат.
Метод «раздавленной» капли. На поверхность
обезжиренного предметного стекла наносят каплю исследуемого материала или суспензию
бактерий и покрывают ее покровным стеклом. Капля должна быть небольшой, не выходящей
за край покровного стекла. Микроскопируют препарат с объективом 40Х. После микроскопии
препараты «раздавленной» капли или «висячей» капли опускают
в дезинфицирующий раствор.
Приготовление фиксированных препаратов-мазков
Для приготовления препарата на обезжиренное предметное стекло
наносят каплю воды или изотонического раствора хлорида натрия, в которую петлей
вносят исследуемый материал и распределяют его таким образом, чтобы получить тонкий
и равномерный мазок. При таком распределении материала в мазке при микроскопии можно
увидеть изолированные бактериальные клетки. Если исследуемый материал содержится
в жидком виде, то его непосредственно наносят петлей на предметное стекло и готовят
мазок. Мазки высушивают на воздухе или в струе теплого воздуха над пламенем горелки,
не давая капле закипать.
Для фиксации мазка предметное стекло (мазком вверх) медленно
проводят 3 раза через пламя горелки. Микроорганизмы при фиксации погибают, плотно
прикрепляясь к поверхности стекла, и не смываются при дальнейшей обработке. Более
длительное нагревание может вызвать деформацию клеточных структур. Мазки крови,
мазки-отпечатки органов и тканей и в некоторых случаях мазки из культур микроорганизмов
фиксируют погружением на 15-20 мин. в метиловый или этиловый спирт, смесь Никифорова,
сулемовый спирт и другие фиксирующие жидкости.
микроорганизм бактерия гриб препарат
3. Методы окраски мазков
Простой метод. Фиксированный мазок окрасить каким-либо
одним красителем, например фуксином водным (1-2 мин) или метиленовым синим (3-5
мин), промыть водой, высушить и микроскопировать.
Сложные методы. Последовательно нанести на препарат
определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету, протравы,
спирты, кислоты и др. Это позволяет выявить определенные структуры клеток и дифференцировать
одни виды микроорганизмов от других. Окрас методом Грама является сложным методом.
Рис.2. Окрас методом Грама (схема).
На фиксированный мазок нанести карболово-спиртовой раствор генцианового
фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1-2 мин ее снять, а краситель
слить.
Нанести раствор Люголя на 1-2 мин.
Обесцветить этиловым спиртом в течение 30-60 с до прекращения
отхождения фиолетовых струек красителя.
Промыть водой.
Докрасить водным раствором фуксина в течение 1-2 мин, промыть
водой, высушить и микроскопировать.
Грамположительные бактерии окрашиваются в темно-фиолетовый цвет,
грамотрицательные — в красный.